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体外染色体畸变试验试剂盒-含细胞

更新时间:2020-11-18
产品型号:221011
所属分类:体外染色体畸变试验产品
描述:体外染色体畸变试剂盒省去阳性底物成分准备、诱导 S9 制备,可以直接使用,大大缩短了实验周期;试剂盒各成分均经过严格的质量检测,无杂菌污染,诱导 S9 活性均符合染色体畸变试验要求,实验结果准确、可靠、重现性高。染色体畸变试验试剂盒应用广泛,可进行食品、化学品、农药、消毒剂、食品添加剂、药物残留、化妆品、容器与包装材料等多个方面的遗传毒理学检测。
详情介绍

体外染色体畸变试验
体外染色体畸变试验的目的是检测培养的哺乳动物细胞染色体结构畸变。结构畸变可份为染色体型和染色单体型。大多数化学致突变物诱导染色单体型突变,但染色体型突都也可发生。多倍体增加表明受试物可导致染色体数目畸变。但是,本方法不用于检测数目畸变。染色体突变和相关事件可以引起很多人类遗传性疾病,并且有证据表明,引起体胡魔癌基因和抑癌基因改变的染色体突变以及相关事件,与人类和实验动物的肿瘤发生有关。体外柴色体畸变试验可应用于已建立的细胞系、细胞株或原代细胞培养,根据培养生长能力、核型的稳定性、染色体数目、染色体差异以及染色体响变的自发频率选择合适的细胞。

体外染色体畸变试剂盒 
IPHASE in vitro mammalian chromosome aberration test kit (CHL)
北京汇智泰康医药技术有限公司针对染色体畸变试验开发染色体畸变试验试剂盒, 本试剂盒省去了阳性底物成分准备、诱导 S9 制备,可以直接使用,大大缩短了实验周期;试剂盒各成分均经过严格的质量检测,无杂菌污染,诱导 S9 活性均符合染色体畸变试验要求,实验结果准确、可靠、重现性高。染色体畸变试验试剂盒应用广泛,可进行食品、化学品、农药、消毒剂、食品添加剂、药物残留、化妆品、容器与包装材料等多个方面的遗传毒理学检测。

体外染色体畸变试剂盒使用说明书
【试验原理】
    在加入和不加入代谢活化系统的条件下,使培养的哺乳类动物细胞暴露于受试物中,用中期分裂相阻断剂秋水仙素进行处理,使细胞停止在中期分裂相,随后收获细胞、制片、染色并分析受试物是否诱发体外培养的哺乳类细胞染色体畸变,从而评价受试物致突变的可能性。
【产品组成】

组分规格数量使用说明保存条件
S9复合物2mL1/-70℃
磷酸盐缓冲液10 mL1使用前混匀
环磷酰胺(CP)0.5 mL1800 μg/mL,使用前混匀
四列毒C(MMC)0.5mL220 μg/mL,使用前混匀
秋水仙素1.5 mL120 μg/mL,使用前混匀
中国仓鼠肺细胞(CHL)1 mL1/

【产品使用说明】
1、细胞复苏
从-70冰箱取出细胞,于37℃水浴融化,1000rpm离心5min,弃上清,用含10%牛血清RPMI 1640培养液(RPMI-10)中重悬细胞;1000rpm再次离心5min,弃上清,用RPMI-10重悬后接种于细胞瓶中培养。
2、细胞准备
将处于对数生长期,贴壁生长良好的CHL细胞用0.25 %胰蛋白酶( Trypsin-EDTA)消化处理制成细胞悬液,5 mL/瓶接种于25cm2细胞培养瓶中,于37℃、5%二氧化碳培养箱中加湿培养约24 h-48h。
3、染毒处理
吸去培养瓶中培养液,加入一定浓度的受试物、S9混合液(不加S9混合液时,需用培养液补足)以及一定量不含血清的培养液,于培养箱中处理6h。在收获细胞前4 h加入细胞分裂中期阻断剂秋水仙素溶液(终浓度为0.2 mg/mL)。具体试验方案见下表:
1)S9混合液配制

S9混合液配制(10mL)
S9复合物1.6mL现配现用。使用过程中,于冰浴条件下保存。
试验结束后,剩余溶液应丢弃,不可重复使用。
磷酸盐缓冲液8.4mL

2)推荐染毒培养体系配制方案(以3个受试物剂量组为例)

处理方式组别培养液体积(mL)S9混合液体积(mL)受试物体积(mL)溶剂体积(mL)阳性对照体积(mL)
CPMMC
活化阳性对照4.450.5//0.05/
剂量14.450.50.05///
剂量24.450.50.05///
剂量34.450.50.05///
溶剂对照4.450.5/0.05//
不活化阳性对照4.95////0.05
剂量14.95/0.05///
剂量24.95/0.05///
剂量34.95/0.05///
溶剂对照4.95//0.05//

注:24小时染毒所用阳性底物需稀释2倍后加入0.05 mL
4、收获细胞及制片
用0.25%的胰蛋白酶溶液消化细胞,加入0.075mol/路化甲溶液进行低渗处理,固定液(甲醇:斌戳酸=3:1)进行固定并滴片,用吉姆萨染液染色,中性树胶封片,并于油镜下进行阅片,记录畸变细胞的坐标位置及畸变类型,具体操作方法参照国标方法进行。
5、畸变类型分析及结果判定
结果分析及判定可参照:473 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验,《化学品测试方法·健康效应卷》(第二版),2013年,(ISBN:978-7-5111-1476-1)。
【注意事项】
1.实验前请自行准备RPMI 1640培养液、牛血清、细胞培养瓶、24孔细胞培养板、灭菌枪头、无菌移液管、二氧化碳培养箱、振荡器、15、50mL离心管等,所有耗材需做无菌处理。
2.实验操作应在符合细胞培养实验要求的环境下进行。

汇智泰康是一家位于中美两地的生物医药合同研发机构,整合中美两地的药物研发技术服务平台,基于AAALAC、GLP、ISO/IEC 17025实验室认证,面向很多企业及研发机构提供分析化学、DMPK、药理药效、生物学、以及毒理安全性评价产品与服务。

主要产品:
体外药物代谢产品
Ⅰ相代谢稳定性试剂盒
Ⅱ相代谢稳定性试剂盒
CYP450酶代谢表型研究试剂盒
不同种属肝微粒体,肝S9
重组酶,标准品,孵育系统等
 
遗传毒性产品
Ames试剂盒
体外染色体畸变试验试剂盒
TK基因突变试验试剂盒
HPGRT基因突变试剂盒
彗星试验试剂盒
诱导大鼠肝S9等
 
空白生物基质
空白血清:食蟹猴,恒河猴,比格犬,大鼠,小鼠,猪,兔
空白血浆:食蟹猴,恒河猴,比格犬,大鼠,小鼠,猪,兔
空白血:食蟹猴,恒河猴,比格犬,大鼠,小鼠,猪,兔
空白尿液:食蟹猴,恒河猴,比格犬,大鼠,小鼠


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