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致泻性大肠埃希氏菌多重PCR检测试剂盒

更新时间:2019-12-12
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所属分类:分子检测试剂盒
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汇智泰康公司的致泻性大肠埃希氏菌多重PCR检测试剂盒可同时检测肠道致病性大肠埃希氏菌 (Enteropathogenic Escherichia coli.,EPEC),肠道侵袭性大肠埃希氏菌(Enteroinvasive Escherichia coli.,EIEC),产肠毒素大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic Escherichia coli.,ETEC),肠道出血性大肠
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产品说明

汇智泰康公司的致泻性大肠埃希氏菌多重PCR检测试剂盒可同时检测肠道致病性大肠埃希氏菌 (Enteropathogenic Escherichia coli.,EPEC),肠道侵袭性大肠埃希氏菌(Enteroinvasive Escherichia coli.,EIEC),产肠毒素大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic Escherichia coli.,ETEC),肠道出血性大肠埃希氏菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli.,EHEC),和肠道集聚性大肠埃希氏菌(Enteroaggregative Escherichia coli.,EAEC)5种常见的致泻大肠埃希氏菌。

产品组成 (50次,25 µL PCR)

组分

数量

体积

Master Mix (2X) *

1管

625 µL

Primer Mix

1管

125 µL

阳性对照

1管

50 µL

H2O

1管

1.0 mL

* Master Mix (2X)含有Taq DNA聚合酶, dNTP,含MgCl2的PCR优化反应缓冲液。使用频率高时一旦融解请于4oC保存或分装保存。

储存条件

-20oC长期保存。多次反复冻融会降低检测效率。

使用说明

  • DNA样本处理、反应体系配制、核酸扩增和结果鉴定等各步骤应分域进行,以避免交叉污染。
  • 细菌基因组DNA可使用市售试剂盒提取,也可按以下方法快速制备:

从平板上挑取适量菌落,加入含有200 µL ddH2O的灭菌离心管中,涡旋震

 

  • 菌液煮沸10 min,冷却至室温后,13,000 rpm离心2 min。
  • 将上清移至新离心管中,即得可用于本试剂盒检测的细菌DNA模板。
  • PCR反应液配制:

2 X Master Mix 12.5 µL

Primer Mix 2.5µL

阳性对照/样品DNA 2 µL

H2O 8 µL

反应终体积 25µL

  • PCR反应条件:

94oC 预变性 5min

94 oC 变性 30 sec

30个循环 63 oC 复性 30 sec

72 oC 延伸 1.5min

72 oC 延伸  5 min

  • PCR反应完成后加入loading buffer无核酸染料琼脂糖凝胶(2%)电泳检测15 µL PCR扩增产物 (120 V,45 min)。电泳完后泡胶染色30min。5种致泻大肠埃希氏菌的检测结果如下图所示。

 

6.  注意事项:

试剂使用前建议短暂离心后开启。

PCR反应液请在冰中配制,以增强检测的特异性。

 

 

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