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代谢表型试验该如何操作?一起来看下

 发布时间:2020-04-26 点击量:88
  参与药物代谢的CYP450酶主要为CYP1、CYP2和CYP3三个家族,共有7种重要的亚型,分别为CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4。如选用特异的选择性抑制剂抑制不同亚型的酶的活性,便可研究药物的酶代谢表型
  根据微粒体种属的不同,可根据实际需求选择人肝微粒体、恒河猴肝微粒体、比格犬肝微粒体、大鼠肝微粒体和小鼠肝微粒体中的一种。需于-70℃冰箱冷冻保存,切记避免反复冻融。代谢表型试验具体操作如下:
 

代谢表型

  1、试验组:
  (1)冰浴融化试剂盒各组分,置于冰上待用;
  (2)除微粒体外,将孵育体系其它各组分按照配比混合并吹吸混匀,于37℃预孵育5min;
  (3)将以上混合液195μL/管分装至1.5mL离心管中,于37℃水浴中保温,5μL/反应加入肝微粒体,吹吸3次混匀于37℃水浴条件下启动代谢反应,使用秒表计时;
  (4)于设定孵育时间点,向孵育体系中加入200μL预冷的乙腈终止反应(预冷乙腈:孵育体系体积=1:1)。
  2、对照组:
  (1)加阳性底物组:反应体系中不加选择性抑制剂,并将受试物换为阳性底物,其它组分加入量不变,缺少体积用0.1MPBS缓冲液补齐;
  (2)无抑制剂组:反应体系中不加选择性抑制剂,其它组分加入量不变,缺少体积用0.1MPBS缓冲液补齐;
  (3)无A液、B液组:反应体系中不加A液和B液,其它组分加入量不变,缺少体积用0.1MPBS缓冲液补齐。
  代谢表型试验注意事项:
  1、试验开始前,请自行准备1.5mL离心管、不同规格枪头、乙腈、37℃水浴锅等。
  2、仅供科研使用,不能用于人体及动物的治疗或临床诊断。
  3、使用前,需于冰浴条件下解冻并混合均匀。
  4、于-70℃冰箱冷冻保存,切勿反复冻融。
  5、在使用过程中,也可根据实际实验需求调整各组分的加入量。

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